超分辨显微镜样品清洁方法详解

超分辨显微镜（如STED、STORM等）对样品清洁度要求极高，任何微小杂质都可能干扰荧光信号或破坏纳米级分辨率。以下是针对超分辨显微镜样品的清洁流程及注意事项：

一、清洁步骤

初步清洁

去除浮尘：使用高压气罐（如SUNTO展途精密仪器清洁罐）或软毛刷（如Datyson镜头刷）轻吹样品表面，避免直接接触。

干燥处理：若样品含水分，用吸水纸（如化学生物实验滤纸）轻轻吸干，或使用氮气枪吹干。

深度清洁（针对顽固污渍）

选择清洁剂：使用光学级异丙醇（与蒸馏水按1:1混合）或专用镜头清洗液（如克拉玛尔品牌）。

擦拭方法：用脱脂棉签蘸取少量清洁剂，沿单一方向轻轻擦拭样品表面，避免来回摩擦。

清洗与干燥

冲洗样品：用去离子水冲洗样品，确保无清洁剂残留。

彻底干燥：用干燥器干燥样品，或使用氮气枪吹干，避免水分残留。

二、清洁工具与试剂

工具：

高压气罐：用于吹去样品表面浮尘。

软毛刷：清除样品表面灰尘，避免划伤。

脱脂棉签：配合清洁剂使用，擦拭顽固污渍。

擦镜纸：用于擦拭样品表面，确保无纤维残留。

试剂：

光学级异丙醇：与蒸馏水混合使用，清洁效果好且不损伤样品。

专用镜头清洗液：适用于高精度光学元件，无腐蚀性。

三、注意事项

防止损伤：

避免使用硬质工具（如金属镊子）或粗糙布料，以防划伤样品表面。

擦拭时力度轻柔，避免对样品结构造成破坏。

化学试剂选择：

禁用强酸、强碱或腐蚀性溶剂（如浓硫酸、氢氧化钠），防止样品结构破坏或荧光标记失效。

使用清洁剂前，先在样品边缘测试，确保无不良反应。

干燥处理：

清洁后需彻底干燥样品，防止残留水分影响显微镜真空环境或导致图像模糊。

对于含荧光标记的样品，避免长时间暴露在强光下，防止光漂白。

四、不同材质样品的清洁方法

生物样品（含荧光标记）：

优先使用压缩空气或软毛刷清洁，避免液体接触导致标记脱落。

若需液体清洁，使用缓冲液（如PBS）冲洗后，立即用氮气吹干。

金属/半导体样品：

可用异丙醇擦拭，去除油污后吹干。

避免使用有机溶剂（如丙酮）浸泡，以防材料腐蚀。

高分子材料：

避免有机溶剂浸泡，以防材料膨胀或变形。

使用去离子水冲洗后，用干燥器干燥。

五、清洁后的处理

真空环境适应：

对于需要真空条件的超分辨显微镜（如某些STED系统），清洁后需将样品静置于真空舱内稳定，避免气体吸附干扰成像。

荧光标记保护：

若样品含荧光染料，清洁后需避光保存，防止光漂白。

使用前检查荧光标记稳定性，确保成像质量。

六、特殊场景处理

细胞样品固定：

使用缓冲液（如PBS）清洗细胞样品后，采用多聚甲醛固定，维持细胞形态。

固定后需用PBS冲洗多次，去除残留固定剂。

纳米结构样品：

清洁后需通过原子力显微镜（AFM）验证表面粗糙度，确保符合超分辨成像要求。

避免使用可能引入污染的清洁工具或试剂。

通过遵循上述清洁步骤和注意事项，可以确保超分辨显微镜样品表面洁净无损，提高成像质量和分辨率。