激光共聚焦显微镜检测时对样品确实有特殊要求,这些要求因样品类型和检测目的的不同而有所差异。以下是对样品特殊要求的详细归纳:
一、生物样品
荧光表达检查:先在荧光显微镜下观察荧光表达是否正常,以确定是否有必要使用激光共聚焦显微镜。
盖玻片厚度:盖玻片厚度要求≤0.17mm,以确保图像质量不受影响。
激发与发射波长:需要明确样品的激发波长和发射波长,以便选择合适的激光器和滤光片。
扫描参数:若需重构图像,需明确扫描区域大小、位置和Z步进等参数,这些会影响测试时间。
样品固定:共聚焦显微镜所需的标本B须贴壁良好,不能悬浮,需要在载玻片上固定好后送样测试。同时,样品需要加抗荧光淬灭剂,盖玻片也需要固定。
二、材料样品
样品制备:主要测试偏材料的样品,样品应提前制备好。
尺寸与颜色:拍出来Z大面积为1.11×1.8mm到5×5mm范围内,颜色可调。样品尺寸没有严格要求,但B须平整。
三、其他类型样品
细菌样品:对于需要死活染色或ROS染色的细菌,建议加冰袋泡沫盒4℃保存,确保样品与冰袋不直接接触。
蛋白或多糖类样品:同样建议4℃保存于冰袋泡沫盒中,或选择5%戊二醛固定后保存。
污泥类样品:可进行冰切或刀切处理。
块体类样品(如金属、瓷砖、岩石等):尺寸长宽高不超过1cm;薄膜类直径不超过2cm,并需保证表面平整,标明拍摄面。建议加冰袋泡沫盒4℃保存,避免样品与冰袋直接接触。
植物类样品:可进行简单冰切及刀切处理,特殊需求如软化等请选择病理组织切片测试项目。常见可测试植物样品包括淀粉、胡萝卜、土豆、叶片、根、茎以及拟南芥等。
布料和纸片类样品:可代为裁剪,直径默认为15mm。
液体类样品:送样量根据测试时样本浓度和检测时间点而定,建议寄送单次检测所需量的3-5倍。若溶剂为有机溶剂(如DMSO、醇类、酚类等),则Z高工作液浓度中溶剂占比应低于5%。
粉末类样品:送样量根据实际需求而定,需注明溶剂种类(对于可溶性粉末)或样本性质、灭菌方式及分散步骤(对于不可溶粉末)。
四、通用要求
新鲜度:所有样本B须尽量新鲜,固定液或悬浮液都不得冷冻结冰。
标记与固定剂:样品需经荧光探针标记(可单标、双标、三标),并使用适当的固定剂和封片剂。
送样信息:提供清晰的激发/发射波长、拍摄类型(2D/3D)、拍摄倍数等要求。若需要特殊染料,请自行提供并附带染色使用说明书。
综上所述,激光共聚焦显微镜检测时对样品的要求涉及多个方面,包括样品的类型、尺寸、形态、保存条件以及标记和固定方式等。为确保检测结果的准确性和可靠性,在送样前应仔细阅读相关指南和要求,并按照要求进行样品准备和处理。