激光共聚焦显微镜对于样品的要求与以及制样方法介绍

激光共聚焦显微镜是一种高分辨率的显微镜技术，广泛应用于生物学、材料科学等领域，能够观察样品的荧光标记、三维结构等。以下是对激光共聚焦显微镜样品的要求及制样方法的详细介绍：

一、样品要求

生物样品

荧光表达：生物样品应先在荧光显微镜下观察荧光表达是否正常，以确定是否有必要使用激光共聚焦显微镜。

盖玻片厚度：要求≤0.17mm。

激发与发射波长：需明确激发波长和发射波长。

扫描参数：若需重构，需明确扫描区域大小、位置、Z步进，这些参数会影响测试时间。

标本状态：样品必须贴壁良好，不能悬浮，并需要在载玻片上固定好后送样测试。

显微成像：样品需要加抗荧光淬灭剂，盖玻片需要固定。

材料样品

测试范围：样品拍出来*大面积为1.11×1.8mm到5×5mm范围内，颜色可调。

尺寸要求：样品的尺寸没有严格要求，但必须平整。

其他样品

对于固体类直接拍摄样品，建议长宽不超过20mm，厚度不超过10mm，重量不超过10g，并标出测试面。

微米材料直接拍摄类建议进行云视频沟通，且微粒尺寸不低于5微米。

二、制样方法

组织切片样品

组织采集：根据实验条件和目的采集组织，可采用液氮冷冻法或多聚甲醛（PFA）固定法。

冷冻包埋：使用气体CO2冷冻包埋法、干冰冷冻包埋法、液氮冷冻法或直接冷冻法进行组织冷冻，然后用冷冻切片机切成5~15μm的切片。

免疫荧光标记：将切片进行免疫荧光抗体标记，标记成功后用荧光显微镜观察，确认后再移至激光共聚焦显微镜扫描成像。

细胞培养样品

荧光表达载体的构建与导入：通过PCR扩增目的蛋白的cDNA，接入到荧光蛋白表达载体的多克隆位点，然后导入到培养细胞中。

细胞培养与转染：按照标准的培养方法进行细胞培养，并在适当时间进行转染。

免疫荧光染色：使用预冷的PBS缓冲溶液洗涤细胞，去除残留的培养液，然后进行固定、通透、封闭、抗体结合、洗涤和封片等步骤。

其他样品

菌液/污泥/污水类样品：进行离心处理后，根据需要进行染色和保存。

生物膜样品：要求样品表面平整，并标出拍摄面，可根据需要在爬片上培养生物膜。

植物类样品：可进行简单冰切及刀切，或进行病理组织切片测试项目。

与细胞共培养的样品：根据样品类型和与细胞的作用方式，进行适当的处理和制样。

三、注意事项

样品在制备和保存过程中应避免污染和损坏。

不同类型的样品可能需要使用不同的荧光染料和标记方法。

在进行激光共聚焦显微镜观察前，应确保样品已经过适当的处理和固定。

激光共聚焦显微镜的使用需要专业知识和技能，应由专业人员进行操作和维护。

综上所述，激光共聚焦显微镜对样品的要求和制样方法因样品类型而异。为确保观察结果的准确性和可靠性，必须严格按照规定的步骤和要求进行制样操作。