激光共聚焦显微镜对于样品确实有特殊要求,这些要求因样品类型的不同而有所差异。以下是对不同类型样品的具体要求:
一、生物样品
荧光表达:
在进行激光共聚焦显微镜测试前,应先在荧光显微镜下观察荧光表达是否正常,以确定是否有必要使用激光共聚焦显微镜。
盖玻片厚度:
盖玻片的厚度要求≤0.17mm,以确保测试的准确性和避免对样品的损伤。
激发与发射波长:
需要明确样品的激发波长和发射波长,以便选择合适的激光器和探测器进行测试。
扫描参数:
对于需要重构的样品,需要明确扫描区域大小、位置和Z步进等参数,这些参数会影响测试时间和结果。
样品固定:
样品B须贴壁良好,不能悬浮起来。需要在载玻片上固定好后送样测试。
对于贴壁细胞,可以将其铺在孔板中的爬片上,按照实验方案进行孵育、固定和染色后,将爬片的细胞面扣置在滴有封片剂的载玻片上。也可将细胞直接培养在共聚焦专用培养皿中进行观察。
对于悬浮细胞,可以用微量移液器吸取适量样品滴加到载玻片上,用盖玻片封片。
组织切片样品需要采集适当大小的组织,经固定、冷冻包埋、冷冻切片、免疫荧光标记后,用盖玻片封片。
抗荧光淬灭剂:
做显微成像时,样品需要加抗荧光淬灭剂,盖玻片也需要固定。
二、材料样品
样品制备:
材料样品需要提前制备好,并确保样品平整。
样品尺寸:
拍出来的样品*大面积应在1.11x1.8mm到5x5mm范围内,颜色可调。但样品的尺寸没有严格要求。
三、其他注意事项
样品质量:
载玻片和盖玻片需要选择质量好、光洁、无杂质的。对于重要实验,需要提前检查载玻片和盖玻片的光学特性,确保无荧光干扰。
样品处理:
样品需经荧光探针标记(可单标、双标、三标)。
样品表面应尽量无氧化皮,观察表面应抛光,以保证表面光洁度和平整度。粉末样品应压实,保证表面平整。
综上所述,激光共聚焦显微镜对于不同类型样品有特殊要求,这些要求涉及样品的荧光表达、盖玻片厚度、激发与发射波长、扫描参数、样品固定、抗荧光淬灭剂使用以及样品质量和处理等多个方面。为确保测试的准确性和可靠性,需要严格按照这些要求准备和处理样品。