激光共聚焦显微镜对样品的要求介绍

激光共聚焦显微镜对样品的要求相对严格，以确保测试结果的准确性和可靠性。以下是对样品要求的具体介绍：

一、生物样品

荧光表达检查：S先，在荧光显微镜下观察荧光表达是否正常，以确定是否有必要使用激光共聚焦显微镜。

盖玻片厚度：盖玻片的厚度应小于或等于0.17mm，以确保测试过程中的光学性能。

激发波长和发射波长：需要明确样品的激发波长和发射波长，以便在测试过程中进行正确的设置。

扫描参数：对于需要重构的样品，需要明确扫描区域的大小、位置和Z步进等参数，这些参数会直接影响测试时间。

样品固定：样品B须贴壁良好，不能悬浮，需要在载玻片上固定好后进行送样测试。同时，样品需要加抗荧光淬灭剂以防止荧光信号在测试过程中减弱或消失。

细胞样品：对于细胞样品，如贴壁细胞或悬浮细胞，在染色结束后需使用抗荧光淬灭剂或50%甘油（甘油和PBS 1:1）进行封片。此外，对于贴壁不牢的细胞或需要特殊处理的细胞，可能还需要使用特定的包被剂如poly-L-Lysine、Fibronectin、Laminin等，或使用玻璃底的共聚焦专用培养皿进行检测。

组织样品：组织样品无论是石蜡切片还是冰冻切片，都需要单层且能很好地贴附在样品池中。冰冻切片的厚度一般在8-10μm之间，而石蜡切片的厚度则在4-5μm之间，这样的厚度可以获得较好的成像效果。此外，用于免疫荧光抗体标记组织切片的载玻片还需经过明胶、蛋白胶、多聚赖氨酸、硅烷等处理，以粘贴组织切片并防止其在免疫反应过程中脱落。

二、材料样品

样品制备：主要测试偏材料的样品，需要提前制备好并确保样品平整。

样品尺寸：样品的尺寸没有具体要求，但拍出来的Z大面积应在一定范围内（如1.11x1.8mm到5x5mm），颜色也可根据需要进行调整。

三、其他注意事项

样品标记：样品需经荧光探剂标记（可单标、双标、三标），以便在测试过程中进行识别和定位。

固定剂和封片剂：针对不同抗原结构特点选用合适的固定剂，如有机溶剂固定剂（丙酮、甲醇）和交联剂固定剂（多聚甲醛）。封片剂可防止样品荧光褪色、干燥及盖玻片脱落，如临时封片可封于甘油+PBS（1:1）中，Y久封片可采用Mowiol等封固剂。

仪器使用和管理：在使用激光共聚焦显微镜时，应记录关机时间、仪器状况等信息，并严格按照操作规程进行操作。

综上所述，激光共聚焦显微镜对样品的要求涉及多个方面，包括样品的荧光表达、盖玻片厚度、激发波长和发射波长、扫描参数、样品固定、细胞和组织样品的特殊处理以及样品标记和固定剂等。这些要求共同确保了测试结果的准确性和可靠性。