激光共聚焦显微镜操作时的注意点介绍

激光共聚焦显微镜在操作时需要注意多个方面，以确保实验的准确性和安全性。以下是一些关键的注意点：

一、开机与关机流程

开机流程：

打开外部电源。

打开显微镜电源开关，等待显微镜初始化完毕。

打开激光器电源开关。

打开电脑，进入操作系统。

双击桌面上的相关软件图标，启动软件。

打开激光器的启动钥匙，使系统处于可工作状态。

关机流程：

保存所有有用的设置和数据。

关闭激光器控制钥匙，使激光器停止工作。

退出操作系统和相关软件。

关闭电脑。

稍后关闭激光器电源。

关闭外部电源供应开关。

二、操作过程中的注意事项

严格按照使用规则操作：不要随意更改操作程序，尤其是激光共聚焦显微镜中的激光发射管，它具有有限的使用寿命并且价格昂贵。在开关的启动顺序和扫描过程中要特别注意保护激光管。

安全防护：

小心不要接触中等功率和高功率的激光辐射，避免直视激光束。

不要在共焦显微镜附近存放或使用易燃或易爆物质，液体或气体。布或纸等易燃材料不应放在光路中。

激光稳定时间：启动或更改激光功率后，激光光源需要大约20分钟才能稳定下来。

图像存储与处理：

扫描的图像存储在计算机中以供进一步处理。由于计算机的硬盘空间有限，应及时将重要数据存储在外部存储设备（如U盘、移动硬盘等）上，但要注意避免病毒感染。

使用前，须严格检查存储设备是否携带病毒。

仪器预热：在开始实验之前，让显微镜预热30分钟到一个小时，以确保其达到稳定的工作状态。

选择合适的参数：

根据荧光探针的激发和发射波长选择合适的激光、激光功率、光谱滤光片和发射滤光片。

确定扫描方法（点、线、面、3D扫描）和扫描密度（分辨率）。分辨率越高，扫描速度越慢，图像信噪比越好，但可能会增加光漂白的风险。

选择合适的物镜倍数和电子放大倍率，以及针孔尺寸，调节激光管电压、光电倍增管功率等参数以达到Z佳状态。

环境控制：

保持室内恒温、清洁、干燥。室温建议控制在22-25摄氏度，相对湿度80%以下。

至少在温差大的季节请24小时控制环境参数。

日常保养：

建议专人管理、操作仪器。

使用显微镜油镜后请用专用镜头水（如无水乙醇和乙醚混合物）清洁镜头前部。

可用拧干的湿抹布清洁外壳。

定期与仪器供应商的专业工程师联系，进行仪器的校准和维护。

避免频繁开关激光器：短时间的停顿工作时，无需关闭系统。只是做一些分析图片等工作时，无需打开激光器控制钥匙，以减少激光器的损耗。但是频繁开关激光器会适得其反。

三、其他注意事项

记录实验过程中的所有相关数据，如激光功率、曝光时间、扫描速度等，这些数据对于后续的数据分析和解释非常重要。

使用合适的对照样本，以消除误差和偏差。

以上内容基于多个权威来源的信息整理，旨在提供激光共聚焦显微镜操作时的全面指导。在实际操作中，请务必遵循仪器制造商提供的具体操作手册和安全指南。