生物显微镜除目前推崇的冰冻超薄切片法外,在这里再介绍一种科学家们用过的沉积技术。在进行分析前加入一种物质,使之与待分析的成份形成沉积物以固定它,然后分析该沉积物。例如,人们常用草酸盐与焦锑酸盐去沉积肌细胞中的ca。前者对胞浆中低浓度的ca敏感性不够高;焦锑吱盐的敏感性高些,可与脑浆中游离ca形成电子致密的沉积物,但焦锑酸盐与钠、锰、钡、铁也形成沉积物,特异性较差。标本制备过程类似于普通透射电镜超薄切片标本的制备,不同之处在于固定前3%焦锑酸钾固定6小时,在染色的肌肉超薄切片上,在每个肌节的A带和2带的中线可见黑色沉淀物、再用未染色的切片做X射线微区分析。曾用二氨基联苯胺四盐酸去沉淀含血红素的物质等等。这种组化的沉淀反应与x射线微区分桥联合应用在不具备冰冻超薄切片条件的实验室可考虑采用。根据待分析元素的峰高可做半定量。
理论上,任何光学系统都不能生成理想的像,因为客观条件下,各类像差的存在影响了生物显微镜的成像质量。除了像差之外,还有一些生物显微镜自身存在的因素影响生物显微镜的成像质量。主要有如下几点:
①在使用显微镜时,被检物体做的比较标准很重要。如:切片厚度是否太厚,盖玻片是否符合标准等。
②物镜按档次可分为6~8个档,常用的为平场消色差物镜。如镜头档次太低,则成像质量会下降。因此,建议选择平场以上档次物镜。
③聚光镜孔径光栏尽量和物镜的数值孔径相符,才能得到理想的图像分辨率。
④调焦系统作为机械部分的重要部件,调焦精度也非常重要。对于生物学初学者或刚接触生物显微镜的操作者,熟练使用调焦系统,能快速找到图像并聚焦,提高工作效率。
⑤载物台在观察切片时,常做X、Y轴的移动。如:双层机械移动台,精度和稳定性较好,能在观察显微图像时提供好的成像质量。
⑥非球面聚光镜能提供非常均匀的照明光线,所观察到的显微图像衬度。
⑦视场光栏应根据观察不同的被检物体和物镜倍率开启到合适的位置,如开得过大或过小显微图像的视场亮度会受到影响。
⑧照明系统如采用温度低,色温较高的照明装置,生物显微镜观察到的是分辨率和锐利度较高的显微图像。